Главная » Гепатит



Количественное определение гепатита в норма


МЕДИЦИНСКИЕ АНАЛИЗЫ

( 831 ) 412-96-23

Количественное определение вирусного гепатита В методом ПЦР в режиме «реального времени».

Молекулярно-биологические методы диагностики.

Диагностическая значимость качественных методов обнаружения ДНК HBV.

Выявление ДНК HBV используется для:

1) ранней диагностики острого вирусного гепа­тита В. ДНК HBV появляется в крови в среднем через месяц после инфицирования и является первым диагностическим маркером. HBsAg появляется в крови заболевшего как минимум на 3 недели позже;

2) выявления скрытых форм вирусного гепатита В. HBsAg в сыворотке таких инфицированных не выявляется, а ДНК HBV - выявляется в плаз­ме крови или ткани печени при использовании высокочувствительных ПЦР тест-систем;

3) выявления мутантных по HBsAg штаммов вируса гепатита В. Ввиду массовых программ вакцинации наблюдается тенденция к возрас­танию частоты таких штаммов. Эти штаммы могут не выявляться методом ИФА и легко об­наруживаются с помощью ПЦР тест-систем.

Диагностическая значимость количественной оценки уровня ДНК HBV в плазме крови:

1) установление диагноза хронического вирус­ного гепатита В.

Персистенция HBsAg более 6 месяцев, повышенный уровень трансаминаз, гистологические признаки выраженного гепа­тита (индекс активности 4) и концентрация ДНК HBV более 10 5 копий ДНК/мл (2*10 4 МЕ/мл), для НВеАg - положительных пациентов или 10 4 копий ДНК/ мл для НВеАg - отрицательных пациентов по­зволяют поставить диагноз хронический гепатит В , требующий соответствующего лечения. Более низкая концентрация вируса и нормаль­ный уровень трансаминаз свидетельствуют в пользу неактивного носительства вируса, тре­бующего динамического наблюдения без не­обходимости противовирусного лечения;

2) мониторинг эффективности противови­русной терапии.

Количественное исследо­вание ДНК вируса гепатита В в плазме крови является обязательным перед назначением противовирусного лечения для определения показаний к нему и в процессе лечения для оценки его эффективности (каждые 3 - 6 меся­цев). Повышение вирусной нагрузки в 10 раз от минимального значения является признаком возникновения устойчивости у вируса к дан­ному лекарственному препарату;

3) мониторинг активности вирусной реплика­ции у носителей HBsAg.

НВsAg – положительным пациентам, которые не удовлетворяют в данный момент всем критериям хронического вирусного гепатита В и которым не показано противовирусное лечение, рекомендуется следующее динамическое наблюдение:

а) HBsAg-позитивным, НВеАg-позитивным пациентам с нормальным уровнем аланин-трансаминаз (ALT) рекомендуется исследо­вание уровня ALT каждые З-6 месяцев;

НВеАg тестируется каждые 6 -12 месяцев.

При повы­шении уровня ALT производится количествен­ное определение ДНК HBV. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка более 10 5 копий ДНК/мл и уровень ALT сохраняется повышенным (но не более чем в 2 раза от нормального значения) в течение З-6 месяцев, или вирусная нагруз­ка более 10 5 копий ДНК/мл и возраст пациента более 40 лет, рекомендуется биопсия печени. Если биопсия показала умеренное/тяжелое вос­паление или значительный фиброз, то этим пациентам рекомендовано противовирусное лечение. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка более 10 5 копий ДНК/мл и уровень ALT со­храняется повышенным (более чем в 2 раза от нормального значения) в течение З-6 месяцев, рекомендовано противовирусное лечение;

б) HBsAg-позитивным, НВеАg - негативным па­циентам с нормальным уровнем ALT и низкой вирусной нагрузкой ( 4 копий ДНК/мл) рекомен­дуется исследование уровня ALT каждые 3 месяца в течение одного года, и каждые 6 -12 месяцев в последующие годы.

Если уровень ALT повышается (но не более чем в 2 раза от нормального значения), то рекомендуется оп­ределение вирусной нагрузки. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка

10 4 – 10 5 копий ДНК/мл и уровень ALT сохраняется повышенным (но не более чем в 2 раза от нормального значения) в течение 3 месяцев, рекомендуется биопсия печени. Если биопсия показала умеренно/тяжелое воспаление или значительный фиброз, то этим пациентам рекомендовано противо­вирусное лечение. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка более 10 5 копий ДНК/мл и посто­янно повышенный уровень ALT (более чем в 2 раза от нормального значения), рекомендо­вано противовирусное лечение.

Материал подготовлен: МЦ Наследственность г. Нижний Новгород, май 2008 г. Согласно Инструкции по применению тест – системы для количественного определения ДНК вируса гепатита В методом ПЦР в режиме реального времени ; Москва, 2008 г. ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.

База знаний: HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя гепатита B (HBV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (ДНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

ДНК HBV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HBV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×10 2 – 1,0×10 8 копий/мл образца .

Вирус гепатита В (ВГВ), количественное определение ДНК.

Hepatitis B Virus DNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood; HBV Viral Load; Hepatitis B Virus DNA Quant.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Копия/мл (копия на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит В (ВГВ) – инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В (HBV). Среди всех причин развития острого гепатита и хронической вирусной инфекции вирус гепатита В считается одной из самых распространенных в мире. Действительное количество инфицированных неизвестно, так как у многих людей инфекция протекает без специфических симптомов и за медицинской помощью они не обращаются. Нередко вирус обнаруживают при проведении профилактических лабораторных исследований. По приблизительным подсчетам, в мире около 350 миллионов человек поражено вирусом гепатита В и ежегодно от его последствий умирает 620 тысяч. В России количество носителей HBV превышает 5 миллионов человек.

Источник инфекции – больной ВГВ или бессимптомный вирусоноситель. HBV передается с кровью и другими биологическими жидкостями. Заразиться можно при незащищенном половом контакте, использовании нестерильных шприцев, переливании крови и пересадке донорских органов, ребенка может заразить мать во время или после родов (через трещины в сосках). В группу риска входят: медицинские работники, у которых возможен контакт с кровью пациента, пациенты, получающие гемодиализ, инъекционные наркоманы, люди, ведущие беспорядочную половую жизнь, дети, рожденные от матерей с ВГВ.

Инкубационный период заболевания – от 4 недель до 6 месяцев. Вирусный гепатит В может протекать как в виде легких форм, длящихся несколько недель, так и в виде многолетней хронической инфекции. Основные признаки гепатита: желтушность кожных покровов, лихорадка, тошнота, утомляемость, в лабораторных анализах – нарушения функции печени и специфические антигены вируса гепатита В. Острое заболевание может быстро приводить к летальному исходу, переходить в хроническую инфекцию или заканчиваться полным выздоровлением. Считается, что после перенесенного ВГВ формируется стойкий иммунитет. Хронический вирусный гепатит В связан с развитием цирроза и рака печени.

Есть несколько специфических тестов для выявления существующего или перенесенного вирусного гепатита В. Для подтверждения наличия инфекции и уточнения периода заболевания используют определение антигенов вируса, антител к ним и ДНК вируса.

Полимеразная цепная реакция отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки позволяет оценить интенсивность развития болезни, эффективность проводимой терапии или развитие устойчивости к противовирусным препаратам.

Существует зависимость между концентрацией вируса в крови и исходом острого вирусного гепатита В. При низком уровне виремии вероятность перехода инфекции в хроническую форму близка к нулю, а инфицированный человек неопасен для окружающих. При высокой вирусной нагрузке ( 5 копий/мл) хронизация возникает часто и больной является потенциальным источником инфекции. Доказана связь между количеством ДНК вируса в сыворотке крови, присутствием HBeAg, повышенной АЛТ и развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Эффективность противовирусной терапии оценивается по уменьшению количества ДНК вируса в крови. Через 3-6 месяцев после начала лечения вирусная нагрузка при адекватном терапевтическом ответе должна уменьшиться на 1-2 порядка. Отсутствие уменьшения количества вируса или его увеличение на фоне проводимого лечения требует пересмотра и изменения терапии.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В совместно с клинической картиной заболевания и биохимическими показателями, маркерами инфекции, а также результатом пункционной биопсии печени позволяет дать прогноз заболевания и оценить необходимость противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита В.
  • Для подтверждения хронической формы вирусного гепатита В.
  • Для выявления носителей вирусного гепатита В и мониторинга активности размножения вируса.
  • Для выявления скрытых и мутантных штаммов вируса гепатита В.
  • Для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита В и принятия решения о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении ДНК вируса гепатита В.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите В.
  • При микст-гепатитах.
  • До и во время противовирусной терапии.

Что означают результаты?

  • Не обнаружено – ДНК вируса гепатита В не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 90 МЕ/мл).
  • 10^5 копий/мл (2*10^4 МЕ/мл) – высокая вирусная нагрузка, активный инфекционный процесс (необходимо проведение противовирусной терапии).
  • 1,0*10^8 копий/мл ( 4,8*10^7 МЕ/мл) – ДНК вируса гепатита В обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций ДНК вируса гепатита В, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (3.6*10^2 – 4,8*10^7 МЕ/мл).

Что может влиять на результат?

  • Количественное определение ДНК вируса гепатита В является обязательным исследованием до назначения противовирусной терапии. Во время курса лечения анализ необходимо повторить через 3-6 месяцев.
  • Вирусный гепатит В нередко сочетается с вирусным гепатитом D.

Кто назначает исследование?

  1. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. - К. Здоровье, 2000 – Т.1. 601-654.
  2. Chan Henry Lik-Yuen, Wong May Ling, and others. Use of Hepatitis B Virus DNA Quantitation To Predict Hepatitis Be Antigen Reversion in Cases of Chronic Hepatitis B. J Clin Microbiol. 2003 October; 41(10): 4793–4795. PMCID: PMC294957
  3. Harrison's Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  4. Management of Hepatitis B. An NIH Consensus Development Conference. Program and Abstracts. October 20–22, 2008.

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В - антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.


Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная - к развитию здорового вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.


Количественное определение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР.

Аналитические показатели: выявление ДНК вируса гепатита В (hepatitis В virus) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и определение вирусной нагрузки в плазме крови.


Определяемый фрагмент - уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.


Количественная характеристика содержания ДНК вируса гепатита важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации гепатита В

Подготовка пациента: Сдача крови натощак.

Источники: http://www.nasled.com/?id=279, http://www.helix.ru/kb/item/548, http://newdiagnostics.ua/index.php?id=274Itemid=274option=com_contentview=article

Комментариев пока нет!

Ваше имя *
Ваш Email *

Сумма цифр внизу: код подтверждения



МЕНЮ




Избранные статьи

Можно есть винегрет при панкреатите

Можно ли винегрет при далее...

Когда болят связки на руках

растянул связки на далее...

Заболевания почек код мкб 10

Патоморфологические изменения в ткани далее...

Популярные статьи

Интересно